鳙生长性状/银鲫抗病分子育种技术与核心育群体的建立

1、鳙生长性状分子育种技术与核心育群体的建立

（1）建立了鳙鱼分子育种研究必要的家系

构建了鳙鱼自交家系3个、雌核发育家系2个、鲢鳙鱼杂交家系6个，除了鲢鳙鱼杂交家系在仔鱼阶段全部杀死用酒精固定取样外，其它鳙鱼家系仍在继续培育，生长良好。在鳙鱼家系的生长阶段取鳍条组织酒精固定，为遗传图谱构建和QTL分析奠定了基础。鳙鱼F1代家系的个体，经过生长性状（体重、体长等）随机抽样测量和统计分析，在体重等性状上符合正态分布，可用于QTL分析。鳙鱼较高密度遗传图谱和QTL分析正在进行中。

（2）鳙鱼生长调控相关基因多态性分析取得初步结果

克隆鳙鱼生长调控轴中的功能基因5个，包括GH（生长激素，2074 bp）、GHR （生长激素受体，1508 bp），MSTN（肌肉抑制素, 3768 bp），MC4R
( 黑素皮质素受体，1334 bp)，LEPR（瘦素受体, 1090
bp），结果在MSTN、GH、LEPR三个基因内共发掘到7个SNP位点 （2个位于外显子，5个位于内含子或UTR区），在GHR和MC4R基因中没有发现SNP。利用连锁不平衡分析和线性回归分析，进行了SNP多态性与生长性状的关联性分析，初步发现共有9个SNP基因型或二倍体型（diplotype）与鳙鱼体重、体长等生长性状显著相关（0.05 或0.01<P）。

（3）筛选了大量鳙鱼微卫星和AFLP等遗传标记，为遗传图谱和分子育种研究提供了充足素材。

筛选鳙鱼AFLP多态性位点900余个。建立鲢、鳙微卫星富集文库6个，筛选文库克隆5000多个，合成SSR 引物400多对；利用鲢鱼基因组测序片段（scaffold）中的近2万多个微卫星序列，有选择性地设计了200对微卫星引物，借用其他作者发表的鲢、鳙微卫星引物合成约100对。我们发现鲢、鳙鱼类微卫星位点之间的扩增通用性可以达到约80%以上。这些鲢和鳙鱼微卫星引物，都是作为鳙鱼遗传图谱构建和QTL分析的候选标记。利用部分鳙鱼微卫星引物，建立了多重PCR体系，可用于鳙鱼家系鉴定和遗传多样性分析和基因型分析。建立鲢、鳙遗传图谱各1个。利用雌核发育系和微卫星标记，进行了鳙鱼着丝粒作图，将部分着丝粒定位到鳙鱼连锁群上。

2、银鲫抗病分子育种技术与抗病核心群体的建立

       （1）制备了吴李碘泡虫抗体，并利用免疫荧光技术，分析了碘泡虫营养体在鱼体内的发育过程，初步结果表明，碘泡虫在鱼体内的发育要经过一个血液增殖期，在血液内发育到一定阶段后，再借血液循环至其适合生长的靶寄生部位定居。并且随机抽样的异育银鲫“中科3号”中只有极少数的鱼血液中能检测到极个别的早期营养体；而在随机抽样的高体型异育银鲫中，在其血液中可以观察到数量较多的早期营养体，在有轻微病症及明显病症鱼体中这种现象尤为显著。上述的结果表明，与高体型异育银鲫相比，异育银鲫“中科3号”可能具有更强的抗碘孢虫侵袭的能力。

       （2）病理切片结合肝脏标记基因阿朴脂蛋白14的抗血清免疫荧光分析表明，异育银鲫“中科3号”的肝脏尽管有少量营养体移居，但不能增殖形成巨大的胞囊；但患病的高体型异育银鲫的正常肝组织被严重破坏，整个肝脏基本上被虫体所充满，形成一个巨大胞囊，在一些小胞囊的四周，可见一些肝细胞。上述的结果表明，与高体型异育银鲫相比，异育银鲫“中科3号”可能具有更强的抗吴李碘孢虫增殖的能力。

（3）分别从洞庭湖、太白湖、潇水等水域选取具有优势的银鲫个体共7尾，经转铁蛋白分析证实为与已推广的异育银鲫“中科3号”和高体型异育银鲫为不同品系，可作为候选新品系进行生长对比和抗病对比实验。2009年进行第一次生长对比实验，从中初步选育出4个品系作为候选品系，2010年完成8种不同银鲫的的生长对比实验。并用嗜水气单胞菌，进行人工感染实验。

      （4）MHC是一个疾病抗性相关的重要候选基因。 MHC I和II型基因都有多态性，这些多态性与机体的抗病力密切相关。对扩增了候选品系的MHCIa片段，序列分析表明具有高度的多态性。